Characterization of the cellular location of the gene product of orf19.1549 in Candida albicans

Abstract

Candida albicans es un patógeno fúngico humano cuya virulencia depende de su capacidad para adaptarse a diversos entornos mediante procesos como la formación de hifas, la respuesta al estrés y la remodelación de membranas. Estos procesos involucran proteínas asociadas a membranas, muchas organizadas en microdominios ricos en esteroles y esfingol lípidos conocidos como balsas lipídicas. Aunque estudios proteómicos han identificado muchas de estas proteínas, gran parte permanece sin caracterizar, lo que limita nuestra comprensión de su biología. Una de ellas es el producto del orf19.1549, previamente detectado en estos microdominios, pero cuya localización y función se desconocen. Nuestro objetivo fue investigar su localización celular mediante la fusión con una proteína fluorescente roja (yEmRFP), utilizando el sistema SAT1 flipper. Para ello, se ensambló un constructo de marcaje por clonación mediante gap repair en S. cerevisiae, combinando las regiones flanqueantes del gen con la cassette yEmRFP-SAT1 en el plásmido pJA37. Tras su recuperación, el constructo fue transformado en C. albicans, y se seleccionaron mutantes heterocigotos luego de la escisión del marcador. La microscopía de fluorescencia confirmó la expresión del marcador fluorescente en algunas células vivas; sin embargo, la ausencia de un patrón de fluorescencia consistente impidió obtener conclusiones definitivas sobre la localización. Si bien el sistema permitió el etiquetado, es necesario optimizarlo para confirmar una integración precisa y la expresión de una proteína funcional. En general, este estudio demuestra la utilidad del sistema SAT1 flipper para el marcaje génico, ampliando su uso más allá de la deleción y proporcionando una herramienta accesible para estudiar genes no caracterizados en C. albicans.