Expression of the E21b, E21d, and E21e antigenic viral protein variants of bovine viral diarrhea in the CHO cell line

Abstract

El virus de la Diarrea Viral Bovina, del género Pestivirus, es un patógeno viral que afecta las vías respiratorias y tasas de fertilidad del ganado a nivel mundial generando substanciales pérdidas económicas para la industria ganadera. Dado el irregular desempeño de las vacunas comerciales disponibles en Chile contra la Diarrea Viral Bovina, y la fuerte inducción de respuesta inmune de la proteína de envoltura E2 de la DVB, nosotros expresamos y caracterizamos tres variantes en un sistema recombinante, de la forma truncada de E2 como base para candidatos de vacuna. Dos vectores de expresión mamífera (pCI-Neo) fueron usados para expresar las variantes de menor tamaño de la glicoproteína principal de envoltura E2, identificadas como E21b, E21d y E21e, en una línea productora estable de células de ovario de hámster chino. Estos genotipos recombinantes expresados compartían características similares electroforéticas y serológicas a las de su contraparte viral. Los vectores plasmídicos contenían una proteína fluorescente (EFGP) y un casete de expresión de resistencia a la neomicina fosfotransferasa, confiriendo resistencia a la Geneticina, para conducir la expresión del cultivo y permitir la selección de células conteniendo el plásmido. Mediante análisis por SDS-PAGE y Western Blot fueron caracterizadas las proteínas blanco expresadas y se seleccionaron las líneas celulares más productoras. Las tres variantes de E2 obtenidas fueron purificadas simultáneamente en un solo paso hasta pureza moderada a través de una cromatografía de Ni-Sepharose, obteniéndose inmunógenos listos para ser utilizadas en pruebas serológicas in vivo.