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Title: Generation of an in vitro model of vulvovaginal candidiasis
Authors: Álvarez Botas, Francisco Javier
Tacuri Pizha, Nelly Juana
Keywords: Candida albicans
Candidiasis vulvovaginal (CVV)
Gap repair
Modelo in vitro
Issue Date: Apr-2024
Publisher: Universidad de Investigación de Tecnología Experimental Yachay
Abstract: La candidiasis vulvovaginal (CVV) es una afección causada por el hongo Candida albicans que afecta a la mayoría de mujeres en todo el mundo. La CVV se produce gracias a la capacidad de C. albicans para colonizar e invadir la mucosa vaginal humana, y a la acción coordinada de varios factores virulentos. Para estudiar la CVV, los investigadores utilizan principalmente modelos animales y, en algunos casos, epitelios humanos reconstituidos. Sin embargo, esos modelos experimentales son caros y las condiciones de crecimiento que C. albicans encuentra en ellos no son del todo similares a lo que ocurre en las infecciones reales. Como parte de un proyecto de generar un nuevo modelo in vitro de CVV que sea más económico, imite mejor la mucosa vaginal humana y no requiera de permisos éticos, en este estudio se intentó visualizar la respuesta de dos genes de C. albicans involucrados en la utilización del nitrógeno que deberían estar activos durante el proceso infeccioso (SAP2, una proteasa que digiere proteínas del hospedador al pH vaginal y GNP2, un transportador de prolina) cuando crece en nuevas superficies biológicas. Siguiendo un protocolo novedoso de “gap repair” en Saccharomyces cerevisiae se logró avanzar en la generación de un stock bacteriano, aunque no se pudo concluir la confirmación del clon correcto. Tampoco se logró observar la visualización de los genes reporteros en nuevas superficies biológicas, pero se pudo descartar un medio compuesto por colágeno para tales fines. En conclusión, fue posible avanzar en el proyecto original, utilizando herramientas de ingeniería genética para solventar los problemas que surgieron en el camino.
Description: Vulvovaginal candidiasis (VVC) is a condition caused by the fungus Candida albicans that affects most women worldwide. VVC occurs thanks to the ability of C. albicans to colonize and invade the human vaginal mucosa, and to the coordinated action of several virulent factors. To study VVC, researchers primarily use animal models and, in some cases, reconstituted human epithelia. However, these experimental models are expensive, and the growing conditions that C. albicans encounters in them are not entirely similar to what happens in real infections. With the ultimate goal of creating a novel in vitro VVC system that is more economical, better mimics the human vaginal mucosa and does not require ethical permissions, this study attempted to visualize the response of two C. albicans genes involved in nitrogen utilization that should be active during the infectious process (SAP2, a protease that digests host proteins at vaginal pH and GNP2, a proline transporter) when grown on new biological surfaces. Following a novel gap repair protocol in Saccharomyces cerevisiae, it was possible to advance in the generation of a bacterial stock, although the confirmation of the correct clone could not be concluded. The visualization of reporter genes on new biological surfaces was also not observed, but a medium composed of collagen could be ruled out for such purposes. In conclusion, it was possible to make important advances in the original project, using genetic engineering tools to solve the problems that arose along the way.
URI: http://repositorio.yachaytech.edu.ec/handle/123456789/737
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